NY∕T 2916-2016 棉铃虫抗药性监测技术规程(农业)
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ID： |
9431251BA0B14F22B52D1D0675644237 |
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文件大小(MB)： |
0.42 |
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页数： |
7 |
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文件格式： |
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日期： |
2021-12-27 |
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ICS 65.020,B 15 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/ T 2916一2016,棉铃虫抗药性监测技术规程,Code of practice of insecticide resistance monitoring of,Helicoverpa armigera (Hübner),2016-10- 26 发布2017 -04-01 实施,中华人民共和国农业部发布,目。吕,本标准按照GB/ T 1. 1-2009 给出的规则起草,本标准由农业部种植业管理司提出井归口,NY/ T 2916-2016,本标准起草单位:全国农业技术推广服务中心、南京农业大学、江苏省植物保护站、山东省植物保护,总站,本标准主要起草人: 张帅、吴益东、张浩男、杨亦桦、武淑文、鞠国钢、宋妹娥,I,NY/ T 2916-2016,棉铃虫抗药性监测技术规程,范围,本标准规定了棉铃虫[ Helico1Jer户aanη 1 ge rα ( Hübner ) ]抗药性监测的基本方法,本标准适用于棉铃虫对常用杀虫药剂及苏云金芽抱杆菌[Bacillus thuringi e11川]杀虫晶体蛋白,Cry1Ac 的抗性监测,2 术语和定义,下列术语和定义适用于本文件,2. 1,浸叶接虫法leaf-dipping bioassay,将浸过药液并晾干的常规棉花叶片放在底部平铺琼脂凝胶的24 孔培养板内，使棉铃虫2 龄初幼虫,接触和取食带药叶片的生物测定方法,2. 2,毒素涂表法surface contamination bioassay,将经磷酸缓冲液溶解的Cry1Ac 蛋白均匀涂布到底部平铺棉铃虫人工饲料的24 孔培养板表面，使,棉铃虫2 龄初幼虫取食饲料表面杀虫蛋白的生物测定方法,3 仪器设备,3. 1 电子天平(感量0 . 1 mg ) ,3. 2 打孔器(直径与24 孔组织培养板孔径相同) ,3. 3 诱虫灯,3. 4 24 孔培养板(内径15 . 6 mm) ,3. 5 微波炉,3. 6 电磁炉,3. 7 移液器( 5 mL 、1mL) ,3. 8 连续分液器(5 mL) ,3. 9 量筒(500 m L) ,3. 10 烧杯(l O mL 、25 mL 、1 00 mL 、500 mL) ,3.门人工气候箱:温度(26 :1: 1) .C 、相对湿度(RH) (60:1: 10) % 、光照周期16 h : 8 h(L : D) ,4 试剂与材料,4. 1 生物试材,4. 1. 1 试虫,棉铃虫2 龄初幼虫(初孵幼虫完成第一次蜕皮后12 h 以内，虫体为黑色，体重范围为1. 0 mg ~ 1. 5,mg ) ,4. 1. 2 供试植物,常规棉花(不含Bt 基因或其他抗虫基肉) ,l,NYj T 2916-2016,4. 1. 3 试验人工饲料,配方参见附录A ,4. 2 试验药剂,4. 2. 1 杀虫剂原药,4. 2. 2 CrylAc 原毒素及Cry lAc 活化毒素,Cry1Ac 原毒素制备自苏云金芽抱杆菌库斯塔克亚种HD - 73 菌株; Cry1Ac 原毒素与膜蛋白酶,(Sigma , T - 8642) 按照蛋白含量20 : 1 比例于3 7"C 水浴2 h ， 1M备Cry1Ac 活化毒素。制备不同批次的,Cry1Ac 原毒素与活化毒素均需通过SDS-理且画…-困山始测毒素的纯度(原毒素分子量为13 0,ku ，活化毒素分子量为6 5 ku) ，并,应> 99 % ) ,5 试验步骤,5. 1 试虫采集与饲,利用诱虫灯,随机采集棉铃,将Cry1,5. 3 处理方,5. 3. 1 浸叶,列浓度，把圆叶,组织培养板内(,面向上放置，每孔,虫逃逸,5. 3. 2 毒素涂表法,移取60.C 左右的人,粘结饲料，室温下自然凝结;,比梯度稀释成5 个~7 个浓度梯,室温下晾干;在24 孔培养板中每,任何药剂的0 . 01 mo l/ L 、pH 7.4 的磷酸盐缓,后再盖上培养板盖以防止试虫逃逸,5. 4 结果检查,内敏感品系的杀虫效果,v) 用量的,用,.4 的磷酸盐缓冲液按等,毒素榕液到饲料表面， 置于,每个浓度处理48 头，并设不含,对照;接虫后的培养板用两层黑色棉布覆盖,接虫后的培养板置于恒温光照培养箱[ (26 士1) .C ,RH (60+10) % , 16 h : 8 h(L : O) J饲养,对于化学杀虫剂，需根据药剂作用特点来确定处理后检查死亡虫数的时间，如拟除虫菊醋类、有机,磷类、氨基甲酸醋类、双目先胶类等杀虫剂处理48 h 后检查结果;对于杀虫作用较慢的药剂如甲氨基阿维,菌素苯甲酸盐、多杀菌素、氟院腮等杀虫剂处理72h 后检查结果。用毛笔轻触虫体，试虫不能正常爬行,即视为死亡,对于Cry1Ac 原毒素和活化毒素，处理120 h 后检查结果。完全死亡或生长发育受到严重抑制(体,2,NY/ T 2916-2016,重小于5 mg) 即视为死亡,6 数据统计与分析,6. 1 死亡率计算方法,根据检查数据，计算各处理的校正死亡率。按式(1 ) 和式(2) 计算，计算结果均保留到小数点后,两位,式中:,式中:,Pz,P/,P,对,式中:,S 一一敏感品系的,7. 3 抗药性水平的评估,根据抗性倍数的计算结果，按照表1,评估,P1 = 主X I 00 …………(1),(2),(3),平的分级标准，对测试种群的抗药性水平做出,表1 抗药性水平的分级标准,抗药性水平分级,低水平抗性,巾等水平抗性,高水平抗性,抗性倍数( R酌， 俏,5. O
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